Inhoudsopgave
Wat betekent reverse transcriptase?
Reverse-transcriptase (RT) is een enzym dat RNA in copy- of complement DNA kan omzetten, reverse-transcriptie genoemd. Dit eiwit is afkomstig van een retrovirus.
Hoe werkt een reverse transcriptase remmer?
Reverse-transcriptase kopieert het genetisch materiaal van het virus en helpt bij het maken van nieuwe virusdeeltjes. Het zorgt ervoor dat enkelstrengs viraal RNA omgezet wordt in dubbelstrengs complementair DNA. Dit virale DNA kan ingebouwd worden in het DNA van de CD4-cel waar het zich verder kan vermenigvuldigen.
Waar staat cDNA voor?
CopyDNA of complement DNA (afgekort als cDNA) is DNA dat door reverse-transcriptie uit mRNA is verkregen. cDNA bevat dus geen introns of signaalsequenties die vaak in een gen te vinden zijn. cDNA wordt bijvoorbeeld gebruikt voor het maken van expressed sequence tags (ESTs).
How does reverse transcriptase work?
Reverse transcriptase then adds DNA nucleotides onto the 3′ end of the primer, synthesizing DNA complementary to the U5 (non-coding region) and R region (a direct repeat found at both ends of the RNA molecule) of the viral RNA. A domain on the reverse transcriptase enzyme called RNAse H degrades the U5 and R regions on the 5’ end of the RNA.
Why is the error rate of reverse transcriptase so high?
Reverse transcriptase has a high error rate when transcribing RNA into DNA since, unlike most other DNA polymerases, it has no proofreading ability. This high error rate allows mutations to accumulate at an accelerated rate relative to proofread forms of replication.
What is RTX reverse transcription xenopolymerase?
The evolutionarily distinct reverse transcription xenopolymerase (RTX) actively proofreads on DNA and RNA templates, which greatly improves RT fidelity. In addition, RTX enables applications such as single-enzyme reverse transcription-polymerase chain reaction and direct RNA sequencing without complementary DNA isolation.
Why is there no proofreading domain in DNA polymerase?
These polymerases are inherently error prone, owing to their lack of a proofreading (3′- 5′ exonuclease) domain. To determine if the lack of proofreading is a historical coincidence or a functional limitation of reverse transcription, we attempted to evolve a high-fidelity, thermostable DNA polymerase to use RNA templates efficiently.